巯基的检测方法

色谱柱Kromasil-C18 (250× 4.6 mm，5微米)，流动相A(0.1%TFA)，流动相B(甲醇)梯度洗脱:流动相B为40% ~ 80%，0~105min，然后保留80% B。NTB标准曲线y=3.67059x+0.14123，回收率101.9%，RSD=l.17%，从而建立了一种高灵敏度的巯基检测方法。

2.以分子荧光光谱法为反应条件，用反相高效液相色谱梯度洗脱法测定巯基。

OPA、丹酰氯和茚三酮与半胱氨酸反应，测定了它们的可见紫外吸收光谱和荧光光谱。在不同的PH、温度和反应时间条件下，通过OPA与半胱氨酸的反应测定荧光。分别吸取0，20，40，60，80，100μL 0.1 mmol/L的半胱氨酸溶液，分别加入10 μlH2O2，室温反应30min，然后加热蒸发，残留物用200μl OPA衍生溶液稀释至5 ml，在4 min时测其荧光光谱。取5μl ph 8.4的硼酸缓冲溶液，混合10次；加入2μl OPA衍生溶液，混合样品进行HPLC。梯度条件:洗脱液B的比例在0分钟时为0，在17分钟时线性增加到60%，在17.5分钟时线性增加到100%，在20min时洗脱结束。激发波长为340nm，荧光检测波长为450nm。

3.柱前衍生HPLC-UV检测方法

三(2-羧乙基)-膦(TCEP)为还原剂，7-氟苯-2-OXA-1，3-二唑-4-磺酸酯(SBD-F)为衍生剂，N-乙酰半胱氨酸为内标，流动相为甲醇。线性范围是8。3 ~ 1042.6 μ mol/L，最低检测限为0。日内精密度为1.67% ~ 1.86%，日间精密度为2。08% ~ 3.06%，平均回收率为90。

4.电化学解吸结合荧光技术。

将样品固定在烷基硫醇自组装膜修饰的金电极表面，利用荧光试剂马来酰亚胺与游离巯基的反应原位标记GSH。恒电位下脱附电极表面的吸附质，检测脱附物质在0.1mol·L KOH溶液中的荧光强度。