如何研究新的免疫相关基因的功能

白斑综合症病毒(白色

地点

综合症状

病毒，WSSV)是危害养殖对虾最重要的病原，致病性强，传播范围广，给世界对虾养殖业造成了巨大损失。但是，仍然没有有效的控制方法。为了有效地控制疾病，有必要了解虾的免疫机制。本文首先利用WSSV建立了研究对虾病毒基因功能的RNAi技术，然后研究了QM蛋白在对虾免疫过程中的作用，为建立有效的对虾疾病防控方法提供了科学依据。

使用RNAi方法，选择在WSSV感染中起重要作用的vp28基因(编码WSSV的主要膜蛋白)作为干扰靶基因。体外合成siRNA后，用体外注射法进行干扰实验。结果表明，序列特异性siRNA干扰抑制了vp28基因的转录和表达。此时，竞争性定量PCR检测表明，vp28的干扰显著降低了虾体内病毒颗粒的拷贝数，延缓了虾的死亡。因此，WSSV建立了用于基因功能研究的RNAi方法。重复注射siRNA三次后，对虾体内的WSSV被完全消除，表明RNAi在对虾体内具有抗病毒作用，为对虾白斑综合征病毒(WSSV)的防治提供了一种新的有效方法。

通过RACE获得对虾QM基因(PjQM ),序列分析表明PjQM具有QM蛋白的基本特征和功能域。通过基因的原核表达和纯化获得融合蛋白。RT-PCR和Western

印迹分析表明PjQM在虾的所有组织中都有转录和表达。实时

PCR分析表明，PjQM基因受病毒刺激后表达上调，表明PjQM参与了对虾的免疫过程。通过GST下拉分析和质谱鉴定，发现PjQM蛋白与血蓝蛋白和肌球蛋白之间存在相互作用。进一步的体外和体内实验证明PjQM和血蓝蛋白之间确实存在相互作用。蛋白质相互作用提示PjQM可能通过酚氧化酶激活系统参与对虾免疫。利用WSSV基因功能研究中建立的RNAi技术研究PjQM的功能。北部的

印迹和蛋白质

blot结果表明，PjQM基因的转录和表达受到PjQM序列特异性siRNA的抑制，虾体内酚氧化酶(PO)的活性显著降低。因此，RNAi结果表明QM可以调节对虾酚氧化酶(PO)的活性。上述结果表明，QM蛋白参与抗病毒免疫的可能途径之一是QM通过与血蓝蛋白的相互作用调节PO的活性。这是首次发现QM在动物免疫反应中发挥作用。