荧光定量PCR和半定量PCR有什么区别？半定量PCR的退火温度和荧光定量PCR的退火温度一样吗？

荧光定量PCR和半定量RT-PCR都可以用来检测基因的表达，只是检测的内容有些不同。荧光定量PCR是在PCR反应体系中加入一种能特异性结合双链DNA的荧光染料(sybr green)或一种能结合靶DNA片段的荧光探针(taqman)。通过监测PCR过程中荧光的变化，对比一些看家基因的荧光变化，来反映目的基因的表达量。荧光定量PCR的主要有效数据是荧光信号增加到最大值一半的时间。半定量RT-PCR通过RT-PCR最终产物电泳条带的亮度间接反映原始模板的丰度。因为荧光定量PCR全程监测PCR扩增的变化，并且可以与看家基因的扩增曲线相对定量，数字化基因表达的准确性高于半定量RT-PCR。半定量RT-PCR是监测的最终产物，而当基因表达水平很高时，PCR体系很可能在反应中后期达到饱和，所以对于高水平表达的基因，半定量RT-PCR不能准确说明问题。但是如果要发表一篇高质量的论文，一些不正常的外国人是不会认可单一荧光定量PCR的结果的，他们还需要作者做一个半定量RT-PCR作为辅助证明。

半定量RT-PCR和荧光定量PCR的引物设计原理并不相同，换句话说，两者的引物并不通用。所以退火温度自然是不一样的，具体的差别取决于实际使用的引物。