不同实验条件对细菌内毒素的影响
1，反应温度37℃ 1℃，时间60min 2min。必须严格控制反应时间和温度，否则会得出错误的结论。如果反应温度或反应时间不足，就会出现假阳性；同时，如果反应温度或反应时间超过药典要求，就会出现假阴性。
2.根据药典规定，试验应在100的环境内，在100的区域内进行。但检验项下并未明确规定对实验室温度的要求，但根据《中国药典》第三十条第四项，除另有规定外，以25℃±2℃为准。
个人认为在100的环境中，没有必要控制100的局部区域的试验环境，因为这个环境容易污染内毒素(原因:前期试验中污染的内毒素溶液挥发后容易从风口吹出)。但实验室温度要控制在20℃以下，这是一个酶促反应，温度对其影响很大。
3.试液的pH值、离子浓度、鲎试剂的灵敏度以及操作者的操作水平都会影响测试结果。
因此，中国药典(2015版)开始对“细菌内毒素检查法”进行了较大的修改:
①进行“鲎试剂灵敏度检查”试验。该试验的目的不仅在于检查鲎试剂的灵敏度是否准确，还在于检查检验人员的操作方法是否正确，实验条件是否符合要求。
(2)“干扰试验”，即当新药有“质量标准”或生产企业的原料来源、配方、生产工艺发生变化时，应进行干扰试验；消除干扰的方法一般采用BET水稀释或加酸碱调节pH来消除干扰。其目的是确认供试品在试验浓度和条件下，对鲎试剂与细菌内毒素的反应无干扰。
③平时做“细菌内毒素检查”时，单独做:样品2管；PPC2管；阳性对照2管；阴性对照2支试管。还规定只有在阳性对照管和PPC管为阳性，阴性对照管为阴性的情况下，才能认为实验有效。否则，实验结果无效。
原因:如果阳性对照管不呈阳性，= = = =这个问题最有可能的原因在于第一步“细菌内毒素标准溶液的配制”。在内毒素标准品或工作标准品中加入BET水是关键的一步，所以必须按药典操作，即加入BET水后，在振荡器上振荡15min，否则内毒素混合不均匀。其次，更换不同批次或厂家的鲎试剂或BET水后，一定要做鲎试剂的灵敏度检查试验，否则不知道这批鲎试剂和检查用的水的灵敏度是否符合要求。-
-阴性对照管不是阴性，说明BET水被污染了。
- PPC试管应呈阳性，但不是阳性，这意味着供试品或其稀释剂会干扰该试验条件下的试验。
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