请简述可用于分离纯化蛋白质的四种方法及其原理？

1.亲和色谱:一种色谱技术，通过分子和它们的配体之间的特殊和可逆的亲和结合进行分离。

原理:将特殊结构的亲和分子制成固体吸附剂，置于色谱柱中。当待分离的蛋白质混合物通过色谱柱时，对吸附剂具有亲和力的蛋白质将被吸附并保留在色谱柱中。没有亲和力的蛋白质会因为没有被吸附而直接流出，所以会和蛋白质分离。然后，通过选择合适的洗脱剂和改变结合条件，将结合的蛋白质洗脱下来。

2.凝胶过滤:一种色谱方法，使用具有一定孔径的凝胶作为色谱介质(如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等。)，而分离出的物质根据分子大小和形状的不同，扩散到凝胶孔中的速度也不同，从而以不同的速度通过色谱柱。

原理:凝胶过滤色谱法又称排阻色谱法或分子筛法，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的质量来进行分离纯化。色谱柱中的填料是一些惰性的多孔网状物质，多为交联多糖(如葡聚糖或琼脂糖)。蛋白质混合物中的物质根据不同的分子大小进行分离。它也被称为分子排阻色谱法。它是一种以多孔凝胶珠为基质，根据分子大小分离蛋白质或其他分子混合物的色谱技术。一般大分子先流出，小分子后流出。

3.聚丙烯酰胺凝胶电泳:用于分离蛋白质和寡糖核苷酸。

作用原理聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种具有分子筛效应的网络结构。它有两种形式:(1)非变性聚丙烯酰胺凝胶。在电泳过程中，蛋白质可以保持完整，并根据蛋白质的分子量、蛋白质的形状和附着电荷的多少而逐渐分离。

4.盐析:增加中性盐的浓度会降低蛋白质、气体和不带电分子的溶解度的现象。这是一种常用于蛋白质分离和纯化的方法。最常用的中性盐是硫酸铵、硫酸钠和氯化钠。