如何从细胞中提取核酸

1.请自行准备:无水乙醇、PBS和1.5mL离心管。

2.取出分离出的液体和洗涤液，进行如下操作:

a)沉淀:在4.5毫升中加入25.5毫升无水乙醇；9毫升加入51毫升无水乙醇。

b)洗涤液:9毫升加入21毫升无水乙醇；18毫升加入42毫升无水乙醇。

c)如有沉淀，可将制备好的沉淀物在37℃溶解，摇匀后使用。

3.细胞处理:a)在培养板上培养单层贴壁细胞，弃去培养基，用PBS洗一次，弃去PBS；

b)将培养瓶中培养的贴壁细胞用胰蛋白酶消化，作为细胞悬液处理，细胞量优选为105-106，以1000 rpm离心5分钟，然后完全弃去上清液，加入100μL PBS振荡至细胞悬浮；

c)培养的细胞为悬浮细胞，1，000 rpm离心5分钟，完全弃去上清液，加入100μL PBS振荡至细胞悬浮。

4.加入200μL裂解液和20μL消化液A，摇匀，室温静置5分钟。

5.加入20 μL消化液B，充分摇匀，56℃水浴10分钟，直至细胞完全裂解。

6.加入500μL沉淀物，轻轻倒置混合。如果有半透明的悬浮物，不影响DNA提取和后续实验。

7.将吸附柱放入收集管中，将上述溶液转移到吸附柱中，静置2分钟，以12000 rpm离心1分钟，弃去收集管中的废液。

8.将吸附柱放回收集管中，向吸附柱中加入500μL洗涤液，在4℃下以65438±02000 rpm离心65438±0分钟，弃去收集管中的废液。

9.将吸附柱放回收集管中，4℃12000 rpm离心2分钟，留下残留洗涤液。

10.取出吸附柱，放入新的1.5 mL离心管中，加入50-200 μL洗脱液，静置3分钟，12000 rpm离心2分钟，收集DNA溶液。提取的DNA可用于下一次实验或保存在-20℃下。