谁知道:霉菌基因组DNA的提取方法

原则:

1.溶解在NaC1溶液中的DNA沉淀。

2.用冷酒精提取杂质少的DNA。

3.DNA在沸水浴中被二苯胺染成蓝色。

方法步骤:

1.核物质的提取:顺时针搅拌，稍快稍重。5分钟

2.溶解DNA:

3.沉淀出含有DNA的粘稠物质:300mL蒸馏水，逆时针慢慢搅拌。

第四步:过滤:取一种粘稠物质。

5.复溶:顺时针搅拌，较慢。3分钟

6.过滤:取滤液。

7.提取杂质少的DNA逆时针搅拌，稍慢。5分钟

8.DNA鉴定:沸水浴5min。

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DNA提取分为三个基本步骤，每个步骤的具体方法可以根据样品类型、影响提取的物质和后续步骤的不同而不同。

通过研磨或超声波粉碎细胞，并通过加入去污剂除去膜脂。

加入蛋白酶、乙酸盐沉淀或苯酚/氯仿提取以去除细胞中的蛋白质，例如结合DNA的组蛋白。

在冷乙醇或异丙醇中沉淀DNA，因为DNA不溶于乙醇，会粘在一起。这一步也可以除盐。

此外，还有通过柱吸附提取DNA的商业试剂盒。

2.细胞分裂

细菌有坚硬的细胞壁，它们必须首先打破翘曲细胞。有三种方法；①机械方法:超声波处理、研磨、均质；②化学试剂法:用SDS处理细胞；③酶解:加入溶菌酶或蜗牛酶可破壁。

3.3的几种方法。DNA提取

(1).浓盐法

A.RNA和DNA是根据它们在电解液中的不同溶解度来分离的。常用的方法是用1M氯化钠提取。将获得的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起振荡，乳化，然后通过离心去除蛋白质。此时，蛋白质凝胶停留在水相和氯仿相之间，而DNA处于上层水相。DNA的钠盐可以用两倍体积的95%乙醇沉淀。

B.也可通过用0.15 MNaCL溶液反复洗涤细胞裂解液，然后用1MNaCL提取脱氧核糖核蛋白，再用氯仿-异丙醇法去除蛋白来去除RNP。

与这两种方法相比，后一种方法可能降解核酸较少。

C.用稀盐酸溶液提取DNA时，加入适当的去污剂，如SDS，有助于蛋白质与DNA的分离。为了抑制组织中DNase对DNA的降解，在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的结合剂。通常使用0.15 mnacl和0.015 m柠檬酸钠，称为SSC溶液提取DNA。(2)阴离子洗涤剂法；蛋白质可用SDS或二甲苯钠等去污剂变性，DNA可直接从生物材料中提取。因为细胞中的DNA和蛋白质往往是通过静电引力或配位键结合在一起的，所以阴离子去污剂常常被用来提取DNA，因为它们可以破坏这种价键。

(3)苯酚提取:苯酚作为蛋白质变性剂，抑制脱氧核糖核酸酶的降解。当用苯酚处理匀浆时，由于蛋白质和DNA之间的键已经断裂，蛋白质分子的表面含有许多类似于苯酚的极性基团。蛋白质分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后，取出水层，重复多次操作。然后，合并含有DNA的水相，利用核酸不溶于乙醇的性质，用乙醇沉淀DNA。这个时候DNA是一种非常粘稠的物质，可以包在玻璃上取出来。这种方法的特点是将提取的DNA保持在自然状态。

(4)水提法:利用核酸溶于水的性质，将组织细胞破碎，然后用低盐溶液去除RNA，再将沉淀物溶于水，使DNA充分溶于水，离心后收集上清液。向上清液中加入固体氯化钠，以调节至2.6M，加入两倍体积的95%乙醇，并立即搅拌。然后，分别使用66%、80%和95%的乙醇。已经取得了DNA样本。这种方法提取的DNA蛋白质含量高，一般不用。为了去除蛋白质，可以通过在提取过程中加入SDS来改进该方法。