半定量PCR之前需要进行普通PCR。为什么有的需要做一次？

荧光定量PCR和半定量RT-PCR都可以用于检测基因的表达，但它们检测的内容有些不同。荧光定量PCR是在PCR反应体系中加入能与双链DNA特异性结合的荧光染料(sybr green)或能与目的DNA片段结合的荧光探针(taqman)，监测PCR过程中的荧光变化，并与某些看家基因的荧光变化进行比较，以反映目的基因的表达量。荧光定量PCR的主要有效数据是荧光信号增加到最大值一半的时间。半定量RT-PCR通过RT-PCR电泳最终产物后电泳条带的亮度间接反映原始模板的丰度。荧光定量PCR可全程监测PCR扩增的变化，并可与看家基因的扩增曲线相对定量，定量基因表达的准确性高于半定量RT-PCR。半定量RT-PCR是监控的最终产物，当基因表达水平很高时，PCR体系很可能在反应中后期达到饱和。所以对于高水平表达的基因，半定量RT-PCR不能准确说明问题。但如果要发表高水平的论文，一些不正常的外国人是不会认可单一荧光定量PCR的结果的，他们还需要作者做一个半定量RT-PCR作为辅助证明。

半定量RT-PCR和荧光定量PCR的引物设计原理并不相同，换句话说，两者的引物并不通用。所以退火温度自然不一样，怎么不一样要看实际用的引物。