核酸杂交的步骤

(1)样品制备:首先需要从待检测的组织样品中提取DNA或RNA。DNA要用限制性内切酶消化产生特定长度的片段，然后将消化产物按分子大小进行凝胶电泳分离。一般来说，DNA分子都有其独特的限制性内切酶图谱，所以经过消化和电泳分离后，在凝胶上可以形成特定的条带。将含有DNA片段的凝胶变性后，直接转移到支持膜上，与之牢固结合。这样，这些检测片段在凝胶上的位置直接反映在膜上的转移中。RNA样品可以在变性条件下通过电泳直接分离，然后转移、交联和固定。

(2)探针的制备:探针是指根据碱基配对原理，能与待测核酸分子结合的核酸片段。它可以是一段DNA、RNA或合成的寡核苷酸。在核酸杂交实验中，探针需要用可直接检测的元素或分子进行标记。这样，通过隔离结合在尹恩膜上核酸分子的探针分子，不仅可以知道被检测核酸片段在膜上的位置，也就是在电泳凝胶上的位置，还可以知道它的分子大小。

(3)杂交:首先需要进行预杂交，即用非特异性核酸溶液封闭膜上的非特异性结合位点。因为转移到膜上的核酸分子已经是变性的分子，只需要在杂交过程中使标记的探针变性，然后让探针在特定的温度下与膜反应，再洗去未结合的探针分子即可。

(4)检测:根据标记探针的方法不同，检测方法也不同。放射性同位素标记的探针需要放射自显影来检测其在膜上的位置；但如果探针用生物素等非同位素方法标记，则需要用相应的免疫组织化学方法检测。