请问丝状真菌的培养基有哪些？
问题描述:
想在常温下长期保存丝状真菌，想知道最常用的培养基有哪些，谢谢！
分析:
从发霉的红薯和酸败的苹果中筛选出霉菌，在沙堡琼脂培养基中28℃培养2-3天，分离出几个真菌菌株。再次在平板上划线分离分离菌株，并选择单菌落表面的少数孢子在马铃薯葡萄糖琼脂培养基中进行玻片培养。在28℃培养2-3天后，在低倍显微镜下观察分离菌株，并通过菌丝体和孢子对分离菌株进行鉴定。观察到分生孢子和有隔膜的菌丝聚集在分生孢子顶端，可鉴定为青霉属。观察到分生孢子梗中有三个分开的弯曲孢子，可鉴定为弯孢菌属。通过对酵母菌的进一步生理生化测定，观察到单细胞的出芽孢子，并鉴定为酵母菌。
关键词:真菌；殖民地；菌丝体；孢子
1前言
真菌这个词来源于拉丁语“蘑菇”。现在菌类这个词的概念不仅包括蘑菇，还代表了一个相当大的生物类群。什么是真菌？从生物学的角度来看，它们是真核微生物的一大类，没有根，没有叶，没有叶绿素。它们不能利用无机物制造食物，靠寄生或腐生生物生存。其中只有少数是单细胞的，其余的是多细胞的。大多数真菌都有分枝或不分枝的花丝，可以有性繁殖和无性繁殖。从形态上可分为酵母菌、霉菌和担子菌。
其实真菌并没有看起来那么抽象。它们在我们的日常生活中几乎无处不在，我们每个人都有过接触和不同程度的感性认识。比如酿酒、做馒头的酵母；曲种(曲霉和根霉)；制作豆腐乳的毛霉和红曲霉；用于发酵饲料的黑曲霉；美味的香菇、木耳、银耳、猴头菇；中药神曲、麦角、冬虫夏草、茯苓和灵芝；此外，还有食物、衣物、器皿等因潮湿而发霉；引起农作物疾病的小麦锈病等等都是真菌。
真菌和细菌在大小、形态、结构和化学成分上有很大不同。单细胞个体比细菌大几到几倍，有细胞壁，但不含细菌细胞壁的肽聚糖。有些真菌由于环境条件的改变而改变形态，这种现象称为真菌的双相性。例如，类鼻疽组织胞浆菌在动物体内呈酵母样。但在人工培养基上是丝状的。
真菌不仅种类多、数量大，而且分布广，与人类生产生活密切相关。有些菌丝可引起人畜疾病，有些霉菌还产生毒素，直接或间接危害人体健康。因此，了解真菌的培养方法和形态是非常重要的。
近年来，anis worth & amp；bi *** y的真菌学词典引入的分类系统。该系统认为真菌不属于低等植物，而是属于一个单独的真菌界，分为粘菌纲和下面的真菌。真菌进一步分为鞭毛菌、接合菌、担子菌和半知菌。本研究从自然界中分离出几株真菌，并通过真菌分类进行鉴定。
2材料
2.1疾病材料
发霉的红薯，腐烂的苹果
2.2培养基
2.2.1沙堡琼脂培养基
配料:蛋白胨10克，麦芽糖40克，琼脂20克，蒸馏水1000毫升。
2.2.2马铃薯葡萄糖琼脂培养基
材料:土豆200克，葡萄糖20克，琼脂20克，蒸馏水1000毫升。
2.2.3保存琼脂培养基。
成分:蛋白胨10g，琼脂20g，蒸馏水1000ml。
2.3设备
无菌室、便携式高压蒸汽灭菌器、电炉、天平、铁架子、灭菌培养皿、锥形瓶、漏斗、试管、烧杯、胶头滴管、石蕊试纸、接种环、酒精灯、量筒、玻璃棒、纱布、滤纸、试管塞、报纸、系绳、标签、培养箱、冰箱、盖玻片、载玻片。
3方法
3.1真菌的分离培养
3.1.1实验准备
沙宝琼脂培养基的配制:用天平称取蛋白胨10g，麦芽糖40g，琼脂20g，用量筒量取蒸馏水1000ml，放入烧杯中，混匀，在电炉中加热融化，加热过程中不断用玻璃棒搅拌，调节PH值至5.4，倒入锥形瓶中，115。
无菌室和接种箱的清洁:用酒精棉球擦洗接种箱的所有内部，将试管架、酒精灯、标签、接种环、笔、火柴等实验仪器放入接种箱，密封接种箱。依次打开接种箱和无菌室的紫外线灯，用紫外线灯消毒20分钟。
3.1.2划线分离培养
在酒精灯的火焰下进行以下操作:
(1)霉菌从发霉的红薯和酸败的苹果中分离，在28℃培养2-3天，分离出几个真菌菌株。再次在平板上划线分离分离菌株，并选择单菌落表面的少数孢子在马铃薯葡萄糖琼脂培养基中进行玻片培养。在28℃培养2-3天后，在低倍显微镜下观察分离菌株，并通过菌丝体和孢子对分离菌株进行鉴定。
(2)
左手握住培养皿，左手拇指、食指、中指以20度左右的角度提起培养皿盖子(角度越小越好，以免空气中的细菌进入培养皿污染培养基)。划线前将接种环稍微弯曲，便于与培养皿中的琼脂表面平行，不至于切到培养基。
(3)
右手握接种环，将发霉的物质分区接种到军刀琼脂培养基平板上。前一个区域划好后，在火焰上燃烧接种环进行灭菌。冷却后，接触上一个区域的最后一两条虚线绘制第二个区域，以此类推，绘制三到四个区域。划线时不宜过多重复旧线，以免形成菌苔。
(4)接种后，在皿底做日期，将皿倒置，28℃培养2-3天。
(5)将分离培养得到的几个分离菌株用沙堡琼脂培养基再次平板划线分离，得到纯单菌落。
3.2真菌的玻片培养(小培养)
3.2.1实验准备
马铃薯葡萄糖琼脂培养基的制备:新鲜马铃薯洗净去皮(注意:不要用发霉的，绿色的。)切成蚕豆大小的薄片或方块，称取所需重量，倒入锅中，加入1000mL水煮沸半小时左右，至土豆酥而不烂，用四层纱布过滤，然后将称好的琼脂加入上述滤液中，用小火加热使其慢慢融化，用玻璃棒不断搅拌，避免烧糊锅底。然后加入预先溶解在温水中的糖溶液，用两层纱布过滤。确定pH值，用1mol/L NaOH或HCl调节至5.5 ~ 6.5，最后加水使其达到1000mL[2]。
无菌室和接种箱的清洁:同2.1.1。
无菌水的配制:将5-6mL蒸馏水放入10mL小试管中，用棉塞塞紧，用报纸包好，115℃高压灭菌20分钟。
实验的操作
取一张直径约7cm的圆形滤纸，铺在一个直径9cm的平板底部，上面放一个U型玻璃棒，上面放一块干净的载玻片和盖玻片，盖上平板，灭菌[3]。
为了防止培养基干燥，在滤纸上滴3-4mL无菌水，挑取真菌孢子，接种到装有无菌水的试管中，摇动试管制成孢子悬液。用灭菌滴管吸取少许灭菌融化的固体培养基，滴在灭菌板中的载玻片中央，用接种环将孢子悬液接种在培养基上，然后盖上载玻片，用镊子轻轻按压，最后盖上平板。
也就是变成了幻灯片文化[4]。
3.3真菌的保存
3.3.1保藏琼脂培养基的制备
取蛋白胨10g、琼脂20g、蒸馏水1000ml，在烧杯中混合均匀，在电炉中加热融化，调节PH值至5.4，分装于试管中，115℃灭菌20min，置于斜面上[5]。
无菌室和接种箱的清洁:同2.1.1。
实验操作
从培养箱中取出经过划线、分离、28℃培养2-3天的平板，放入无菌室进行如下操作:在无菌室中，酒精火焰附近，从平板培养基中挑取可疑菌落，用接种环轻轻刮去其表面的几个孢子，拔出接种环，立即伸入斜面培养基中，不要碰到斜面和管壁， 直到斜面底部从斜面底部向斜面顶部弯曲，并用火焰对喷嘴进行消毒，并塞住棉花。 接种后，用火焰对接种环进行消毒，并放下接种杆。最后在斜管壁上标注日期，放入28℃培养箱中培养2-3天，再放入4℃冰箱保存[6]。
3.4酵母的鉴定-生化试验
3.4.1糖发酵实验
从12.5%豆芽汁制备2%糖溶液(4%棉子糖)并包装在杜氏管中。杜氏管是测量发酵的主要容器，在杜氏管中可以发酵某种糖的小管顶端应该可以看到一定量的CO2气泡[7]。具体操作:a .将豆芽汁分装到杜氏小管中，每管1.2ml，15 lbs，灭菌15分钟。b .用无菌蒸馏水配制10%的糖液，煮沸15分钟，稍凉，用无菌吸管吸取一定量的糖液，分装于杜氏管中，直至糖浓度达到2%(棉子糖4%)，成为糖发酵的基础培养基。c .将新培养的待鉴定菌株接种于发酵管中，在25-28℃培养，每天观察结果。一般可观察2-3天，未发酵或弱发酵者可延长至10天。因为半乳糖苷酶是一种适应性酶，所以发酵半乳糖的观察可以延长2周至1个月[8]。
3.4.2同化碳源试验
A.菌液的制备:将酵母制成菌悬液(1ml无菌生理盐水加少许新培养的酵母约一个接种圈制成悬液)。b、倒平板:将所有悬液倒入20毫升基本培养基中，融化后冷却至45℃左右，倒入培养皿中，将培养基中的细菌混合均匀，静置，待凝固后，将培养皿在28℃下倒置数小时，防止表面过湿。c .取样:然后在培养皿底部标记碳源名称，分别用无菌不锈钢勺或无菌药勺，根据标记加少许糖(米粒大小左右)，如果效果不明显，第二天再加糖。d .观察:观察结果时以葡萄糖为对照，一般为25-28℃培养1-2天的观察结果。那些能同化的，会在增加的碳源周围形成一个生长圈。对于生长缓慢的酵母菌或在测定半乳糖同化作用时，可适当采用液体培养法，即将酵母菌接种到含有一定碳源的液体培养基中，在25-28℃培养65438±0-2周，以含有葡萄糖的液体培养基为对照，观察酵母菌的生长情况，是否更加浑浊或形成环状、岛状等。如有必要，观察可延长三周[9]。
4结果和分析
4.1真菌培养特性观察
4.1.1真菌在固体培养基上的生长性能
酵母在固体培养基上的生长表现:固体培养基上的酵母菌菌落呈油状或蜡状，表面光滑、湿润、有粘性，有的表面呈粉状、粗糙或起皱，边缘整齐，有缺陷或丝状。菌落的颜色是乳白色、黄色和红色。
霉菌在固体培养基上的生长性能:不同霉菌在固体培养基上培养2-3天，霉菌菌落呈蓬松、絮状、绳状。菌落大小因物种而异，有的可扩展至全固体培养基，有的有一定的局限性(直径1-2㎝以下)。许多真菌孢子和菌丝能产生色素，导致菌落表面、背面甚至培养基上呈现不同的颜色，如黄色、绿色、黑色和橙色。
4.1.2真菌玻片培养的形态学观察
酵母的玻片培养形态观察:与细胞相似，多为单细胞，一般为椭圆形、圆形或圆柱形。酵母细胞比细胞大，有些酵母与子细胞连接成链，形成假菌丝。酵母主要是无丝分裂，主要是分裂和出芽。
显微镜检查霉菌在小培养物中的生长情况，发现菌体由许多分枝或不分枝的菌丝组成，许多菌丝缠绕在一起形成菌丝体。显微镜下菌丝呈管状，多为有隔膜的菌丝。菌丝分为多个细胞，每个细胞含有一个或多个细胞核，孢子为分生孢子。
4.2图像分析
4.2.1
图1菌落产生黄晴霉菌图2菌丝体和孢子产生黄晴霉菌。
28℃生长速度较快，1-2天长出菌落，10-12天直径3-5㎝。开始是白色，然后是蓝色或灰绿色。菌落质地致密蓬松，菌落表面有明显的放射状沟槽，边缘呈白色。菌落为簇状菌丝体，无特殊气味，反面为亮黄色至暗黄色(见图1)。
显微镜下，低倍镜下，菌丝为有隔膜的菌丝，菌丝分裂成多个细胞，形成相当清晰的分散的帚状分枝分生孢子链，分生孢子呈椭圆形(见图2)。
结合以上观察的菌落形态和小培养物的培养特征，可以鉴定为产黄晴霉菌。
4.2.2
图3新月弯孢菌菌落图4新月弯孢菌菌丝和孢子
28℃时，青霉菌生长速度不如青霉菌快，3天长出菌落，颜色深灰绿色，背部蓝黑色。菌落质地为棉絮状，菌落为丛生菌丝，无特殊气味(结果见图3)。
显微镜下，低倍镜下，菌丝分开，多分枝，分生孢子直立。孢子以轮状附着在分生孢子梗上，有三个独立的弯曲(结果见图4)。
结合上述观察到的小培养中的菌落形态和培养特征，可以鉴定为弯孢菌属的新月弯孢菌。
4.2.3
图5酵母菌落图6酵母细胞
在28℃下培养3天后，菌落呈乳白色，有光泽，扁平，边缘整齐，表面湿润而有粘性。菌落外观与细菌菌落相似，但比细菌菌落更大、更厚、更圆。不透明，有酒精味，容易被接种针挑起(见图5)。
显微镜下，低倍放大，生殖方式为出芽、单细胞、圆形、椭圆形或香肠形(结果见图6)。
结合上述菌落形态和小培养中培养特性的观察，可初步鉴定为酵母菌。
4.3酵母的生理生化测定
测定结果如下表所示:
葡萄糖麦芽糖半乳糖乳糖蔗糖蜜二糖D-木糖D- ***糖L- ***糖
发酵+++-\ \
同化++- ++
对于初步鉴定为啤酒酵母的菌落，进一步采用发酵和同化试验进行鉴定。根据上述一系列生理生化指标，可以鉴定为啤酒酵母。
5讨论
根据本文所做的实验和本人查阅的资料，对真菌的基本培养条件和特性，霉菌和酵母菌的繁殖方法，真菌实验研究的意义，讨论如下:
本研究以撒保为分离培养基，确定了真菌的最适培养条件:葡萄糖20g/l，琼脂10g/l；而马铃薯培养基在小培养中更有利于孢子形成，因此获得更多的菌丝和孢子；为了防止菌落连成片，小培养物在观察到孢子后也要及时拍照，放入冰箱备用；培养时间在沙氏培养基中为2-3天，在沙堡培养基中为2-3天。
小培养中的培养时间为1-2天。
培养温度为28+1℃。本研究成本低、操作简单、效率高，对真菌的分离鉴定和菌株库的建立具有一定的指导意义。今后，有必要进一步研究不同真菌在培养基中的特征表现，以便快速鉴定真菌。
真菌的培养条件:真菌对营养要求低，易培养，喜酸性，最适PH为5-10；多数为嗜冷菌，最适温度为22-28℃。少数病原真菌在37℃生长良好，少数真菌在0℃生长。需要在高湿度下生长，在相对湿度为95%-100%的条件下大多生长良好；真菌的生长速度比细菌慢，需要几天才能形成典型的菌落。
真菌菌落特征:1)霉菌菌落:由菌丝体和孢子组成，菌落大于细菌和放线菌，有的甚至覆盖整个培养基表面，菌落疏松蓬松或絮状。由于霉菌的基质菌丝体生长在培养基中，其菌落不易被接种针挑起；由于霉菌孢子具有各种颜色，其菌落表面也呈现出黄、绿、青、橙、黑等颜色。2)酵母菌群:由单细胞酵母组成。其外观与细菌相似。呈圆形，表面湿润、光滑、不透明，易被接种环挑起；大多数菌落为乳白色，少数为红色；长时间培养的菌落表面皱缩。3)酵母样菌落:外观与酵母菌落相似，但此菌落可向下生长，这是由出芽孢子与母细胞连接形成的假菌丝伸入培养基所致，如白色念珠菌的菌落。
酵母通过出芽、分裂和孢子形成来繁殖。霉菌无性繁殖(孢子、节孢子、厚垣孢子、孢子囊孢子和分生孢子)和有性繁殖(卵孢子、接合孢子和子囊孢子)。
此外，研究与人类生产生活密切相关的真菌具有重要意义:1)真菌的工业利用:人类生活中几乎所有种类的工业部门，如食品、纺织、制革、造纸、医药、洗涤、饲料、石油发酵和三废利用等。，但真菌也会引起相应部门产品的腐蚀和霉变，如食品、纺织品、皮革制品、电器设备等。2)真菌与农业生产:真菌入侵植物引起的植物病害往往给作物造成重大损失，甚至绝收，如小麦锈病。真菌对植物也有有益的影响。有的真菌与植物的根部结合形成菌根，形成* * *互利的复合体；同时，真菌在生长发育过程中可以分泌生长素促进植物的生长。3)真菌与医疗:真菌类药材历史悠久，用途广泛，很多都是珍贵药材。如灵芝、冬虫夏草、茯苓、红曲、黄竹、神曲、猴头菇、木耳等。真菌对制药工业做出了重要贡献。但少数真菌可引起人类疾病，这些致病真菌引起浅部真菌病和深部真菌病，应加强真菌病的诊断和预防。4)真菌与生物工程:近年来，真菌的分子生物学研究非常活跃。例如，基于酵母的基因工程主要用于生产人胰岛素和干扰素等药物。真菌在制药工业中的成就显示了生物工程的巨大潜力。
本文所涉及的实验总体上是成功的，取得了理想的效果。但由于本人真菌研究经验有限，实验条件缺乏，一直只限于对真菌的基础研究，未能深入。
6结论
真菌对人类有利也有弊，人们越来越重视。研究真菌意义重大。基于此，本文对单个菌株进行了一些基础研究。
本文从了解和掌握真菌的基础知识入手，进行单个真菌的培养和鉴定。通过实验，我们掌握了产黄晴霉菌、新月弯孢菌和啤酒酵母的培养和鉴定程序，以及相应的培养特性和鉴定结果分析方法，为今后进一步的真菌学研究做好准备。
真菌仍有许多领域未被发现和利用，我们应继续对其进行调查、研究和总结，以诊断农作物病害和人畜疾病，发展食品工业、医药工业、农业生产、医疗卫生、生物工程防治等。，挖掘我国真菌资源，开发利用有益真菌，造福人类。
参考
白等《微生物实验技术》，山东大学出版社，1987: 459。
廖，，王，等.真菌学，人民卫生出版社，1989: 93 .
[3]张卓然等.医学微生物学，科学出版社，1998: 102-103
[4]中国科学院微生物研究所等《常用及常见真菌》，科学出版社，1973: 251。
[5]李玉妹等.微生物学，中国医学科技出版社，1999: 45
文等《现代医学微生物学》，上海医科大学出版社，1999: 724。
[7] Disalvo AF等:感染引起的马尔尼菲青霉菌，Am
j临床路径1973:
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[8]霍尔·WJ:心内直视术后的青霉菌心内膜炎
外科和修复术
瓣膜插入，Am心脏1974:8(7):501
[9]黄锡南等:急性播散性青霉病
路径1963:3(9):167
致谢辞
首先，我要感谢我的学校，老师和同学在过去的四年里对我的关心和帮助。这篇论文的完成有赖于多方面的帮助。感谢学校给我提供实验场所和材料。特别要感谢我的两位实习老师，感谢任慧颖给我提供研究方向和实验设计指导。在论文的最后阶段，我要感谢她把我的实验结果拍下来，插入论文中。感谢邹玲先生在实验中的帮助。另外还要感谢和我一起实习的同学，一直和我一起解决问题，克服困难。最后，再次表达我实习期间的关心和担忧。