鲁米诺论文高中
答:根据标记物的种类不同,免疫标记技术可分为放射免疫分析、酶标记免疫分析、荧光标记免疫分析、化学发光标记免疫分析和胶体金标记免疫分析。它们之间有相似之处,也有不同之处,总结如下。
一、相似点主要包括以下几个方面:
1,都有很高的特异性。五种免疫标记技术的免疫技术都是采用抗原抗体反应,抗原和抗体的结合是一一对应、特异性结合的,所以都具有非常高的特异性。
2.都有很高的灵敏度。由于五种免疫标记技术的标记技术都是使用示踪标记,如酶、放射性核素、荧光素、胶体金、致密物质等,与标本中相应的抗体或抗原反应后,不需要测量抗原抗体复合物本身,只需测量复合物中的标记物即可,使看不见的反应通过化学或物理手段放大,转化为光、色、电、脉冲等可见的、可测量的信号,即可使用。
3.检测对象是相同的。除放射免疫法只能检测抗原外,其他四种免疫标记技术均可检测抗原或抗体,即通过已知抗原(或抗体)与待测抗体(或抗原)的特异性结合,定性或定量检测抗体或抗原。
4.免疫标记的程序基本相同。包括纯化抗原或抗体、确定标记物质(即确定最终检测方式)、标记、分离纯化标记产物、分析鉴定等一系列程序。
二、差异主要包括以下几个方面:
1,检测原理不同。首先,酶免疫分析是以酶标抗体(或抗原)为主要试剂,结合抗原抗体反应的特异性和酶催化底物反应的高效性和特异性的一种免疫方法。它对标记酶有特定的要求,如高活性、高纯度。放射免疫分析是以放射性同位素为示踪剂的标记免疫分析方法。免疫荧光技术是以荧光素为标记物,与已知的抗体或抗原结合,然后以荧光素标记的抗体为标准试剂,检测并固定未知抗原。对用于标记的荧光素也有特定要求,如荧光效率高、与蛋白质结合稳定、易于保存等。发光免疫分析是一种新型的超微量分析技术,它将发光分析与免疫反应相结合。它是用发光体标记抗体(或抗原),通过发光检测抗原(或抗体)反应的一种免疫测定方法。免疫胶体金标记技术是一种新的免疫检测方法,它以胶体金为示踪剂,胶体金在碱性环境中带负电荷,因静电与抗体蛋白分子的正电荷基团形成牢固的结合,应用于抗原抗体反应。
2.使用不同的标记。因为免疫标记的原理各不相同,所以使用的标记物也必然不同。荧光免疫分析的标记物是荧光素,一般用四乙基罗丹明、异硫氰酸荧光素和藻红蛋白。酶免疫分析的标记物是酶,一般使用辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)。放射免疫法采用放射性核素标记,一般为131I、125I、14C和3h;发光免疫分析利用化学发光物质进行标记,常用的化学发光试剂有鲁米诺、异鲁米诺以及鲁米诺的衍生物;免疫胶体金技术的标志是胶体金,胶体金是由金盐还原成原金而形成的金颗粒悬浮液。胶体金颗粒的大小多为1-100 nm。
3.检测需要不同的仪器或方法。酶免疫检测是加入酶底物显色,然后用酶标检测仪进行比色;放射免疫分析使用液体闪烁计数器、晶体闪烁计数器或x光胶片进行免疫分析。免疫荧光技术使用荧光比色计或荧光显微镜进行分析;发光分析仪是发光免疫分析所需的仪器;免疫胶体金技术通过免疫电竞或斑点免疫金染色进行检测。