甲醇检测与分析论文标题

海洋生物富含活性物质。本文综述了近三年来国内外从海洋生物中分离得到的萜类和苷类化合物，并对其研究趋势进行了展望。这些新发现的萜类化合物广泛分布于藻类、珊瑚、海绵和一些海洋真菌等海洋生物中，主要以单萜、倍半萜、二萜和三萜等形式存在。然而，糖苷主要以糖苷、甾体糖苷和萜类糖苷的形式存在于海洋生物如海藻、海绵、海参和海星中。

海洋萜类糖苷；生物活性

摘要海洋生物表现出一些重要的生物活性。摘要:综述了2005年以来国内外海洋生物中萜类和苷类化合物的研究进展，为合理开发利用提供科学依据。萜类化合物主要以单萜、倍半萜、二萜和三萜的形式存在于海藻、珊瑚、海绵和一些真菌中。和萜类结构的苷类分布于海藻、海绵、海参和海星中。

关键词海洋生物；萜类化合物；糖苷；生物活性

海洋是生命的源泉。由于海洋环境的特殊性，具有高压、低营养、低温(尤其是深海)、无光、局部高温、高盐等极端生命环境。海洋生物适应了海洋独特的生存环境，这必然为海洋生物创造了独特的代谢途径和遗传背景，必然会出现许多陆生生物没有发现的具有新结构类型和特殊生物活性的新化合物。

萜类化合物是一种天然碳氢化合物，其分子中含有异戊二烯(C5H8)的基本单元。因此，所有来源于异戊二烯的化合物，其分子式符合通式(C5 H8) n的称为萜类或异戊二烯类，但在某些情况下，由于碳正离子、烷基化、降解等原因引起的甲基迁移或碳架重排，分子的某一段不会完全遵循异戊二烯定律，产生一些变形的碳架，仍属于萜类。海洋生物中的萜类化合物主要是单萜类、倍半萜类、二萜类和倍半萜类，而三萜类和四萜类种类和数量较少，大多以糖苷形式存在。萜类化合物是海洋生物活性物质的重要组成部分，广泛分布于藻类、珊瑚、海绵、软体动物等海洋生物中。，并具有细胞毒性、抗肿瘤、杀菌和止痛活性。

糖苷的分类方法有很多种，根据在生物体内是一级还是二级，可分为一级糖苷和二级糖苷(一级糖苷去掉一个以上的糖苷称为二级糖苷或二级糖苷)；根据糖苷中所含单糖基团的数量，糖苷可分为单糖苷、二糖苷、三糖苷等。苷类根据某些特殊的化学性质或生理活性可分为皂苷类和强心苷类。根据苷元的化学结构类型，苷元可分为黄酮苷类、蒽醌苷类、生物碱苷类、三萜苷类等。大多数海洋糖苷都是根据这一特征进行分类的，主要包括鞘脂糖苷、甾体糖苷、萜类糖苷和大环内酯糖苷等。糖苷存在于许多海洋生物中，如海藻、珊瑚、海参、海绵等。以往的研究表明，大多数海洋苷类化合物具有抗肿瘤、抗病毒、抗炎、抗菌和免疫增强等生物活性。Ara-C(d-阿拉伯糖胞嘧啶)1，Ara-A 2和Ara-C的N4-C16-19饱和脂肪酰化衍生物3是海洋苷类的成功开发模式[1]。

本文综述了2005年以来国内外从海洋生物中分离得到的萜类和苷类化合物。

1萜类化合物

1.1单萜2005年，M. G .克诺特等人[2]研究了三种多卤代单萜的活性，即从红藻中分离的Plocaralides A-C(1 ~ 3)[3，4]，发现了化合物Plocaralides B(2)。

1.2倍半萜烯两个新的倍半萜烯化合物，6-epi-ophiopolin G(4)和6-epi-ophiopolin N(5)是从海洋污泥中的杂色绿球藻GF10的发酵液中分离得到的。在1～3微米的浓度下，该化合物能使神经2A细胞凋亡。蛇绿岩是天然的三环或四环倍半萜化合物，对线虫、真菌、细菌和肿瘤细胞具有普遍的抑制活性。

纪凡·费尼卡尔等人从海洋沉积物中分离出一株放线菌CNH-099，并从该菌株的代谢产物中分离出具有细胞毒作用的新型marinonc衍生物neomarinone(6)、isomarinone(7)、hydroxydebromarinone(8)和甲氧基Euromomarinone (9)，均为倍半萜萘醌类抗生素。Neomarinone(6)和Marinones (7 ~ 9)在体外对HCrll6结肠癌细胞表现出中度细胞毒性(IC50=8μg/ml)，neomarinone(6)对NCI-s60癌细胞也表现出中度细胞毒性(IC50 = 10μ g/ml) [6]。

化合物侧柏素倍半萜(10 ~ 12)是从采自希腊北部无边爱Cios岛的红藻L. microcladia中分离得到的。红藻用有机溶剂CH2Cl2/MeOH (3:1)提取，洗脱剂为环己烷/EtOAc(9:1)。最后，通过HPLC纯化化合物(10-12)。还研究了这些化合物的活性，发现这三种化合物都对肺癌细胞非小细胞肺癌-N6和A-549具有抑制作用。化合物(10): IC50 = 196.9微米(非小细胞肺癌-N6)和242.8微米(A-549)，化合物(11): IC50 = 73.4微米(非小细胞肺癌-N6)和52.4微米(A-549)，化合物(12): IC50 = 83.7微米(非小细胞肺癌-N6)和865438后两种化合物对肺癌细胞的细胞毒性明显高于第一种化合物。推测后两种化合物结构中酚羟基和五环双键的存在可能会提高化合物的活性，但化合物中溴原子的存在对其活性没有影响。从采自中国南京的冈村红藻中还分离出4种倍半萜，即劳雷过氧化物(13)、10-溴代皂角苷(14)、异溴月桂醇(15)和65438。从红藻L. luzonensis中分离出五种斯奈德烷倍半萜(17 ~ 21)[9]。

从软海绵动物软软骨鱼中分离出4个含氮的桉树倍半萜haliconadins A-D(22 ~ 25)[10]。在日本冲绳的田芸港收集海绵，并将2.5千克样品溶解在4L甲醇中。获得的115g甲醇提取物分别用1200ml乙酸乙酯和400MlH2O提取。7.9g乙酸乙酯萃取物经硅胶柱层析，以甲醇/氯仿(95:5)和石油醚/乙醚(9:1)为洗脱剂，得到化合物A-D (22 ~ 25)和已知化合物阿坎烯B和C。活性测试表明，化合物A-D具有抗菌活性，化合物B和C也具有抗真菌活性。化合物halichonadins C对新生隐球菌的IC50达到0.0625μg/ml。三个部分环化的倍半萜(26 ~ 28)具有抑制磷酸酶Cdc25B的活性，是从海绵刺果中分离得到的。[11].冷冻海绵样品用4℃去离子水浸泡并冷冻干燥，然后用甲醇/二氯甲烷(1:1)和甲醇/H2O(9:1)有机溶剂提取得到粗提物。通过活性示踪进一步分离粗提取物(IC50=8μg/ml ),并将其溶解在100 ml甲醇/H2O(9∶1)中以获得1.2g粗提取物，加入300ml正己烷以获得部分溶解在甲醇/H2O(7∶3)中的水相。用300ml CH2Cl2提取的级分显示出对磷酸酶最强的抑制活性(IC50=6μg/ml)，然后通过反相C-18柱HPLC分离得到部分环化的倍半萜化合物(26)16-氧代-丝瓜内酯(12 mg，TR=18min)，化合物(27)16-羟基-丝瓜内酯(2.5mg从中国海南的直立蹄兔中分离出5个倍半萜类化合物，Hyrtiosins A-E (29 ~ 33)。

氧化倍半萜化合物赤霉酮(34)、过氧化赤霉醇(35)和赤霉醇(36)是从台湾软珊瑚赤霉菇[13]中分离得到的，化合物(35)具有轻度细胞毒性[14]。从珊瑚中提取的七种倍半萜代谢物(37 ~ 43) [15]。，其包含橄榄、桉树和马妓的骨架结构，已经显示出对尤尼斯种的疟原虫具有温和的抑制作用。

1.3二萜类化合物以前很少从绿藻中分离报道，但与2004年相比，提取的代谢产物数量有所增加[16]。许多新的二萜类化合物是从澳大利亚塔斯马尼亚岛的绿藻褐毛蕨藻中分离出来的。其中化合物(44 ~ 48)是从无分支绿藻中提取的[17]，而酯类萜类化合物(49)是从有分支绿藻中获得的。研究还表明，提取的酯类萜类化合物对细胞、鱼类和微生物都有不同程度的毒性[17]

日本Koyama K等人从褐藻Ishige okamurae的一种未知海洋真菌(MPUC 046)中分离到一个新的二萜化合物Phomactin H (50) [19]。真菌(MPUC 046)在含有150g小麦的400ml海水中于25℃发酵31天，然后用CHCl3溶剂提取，经硅胶层析和HPLC纯化得到Phomactin H。该化合物与已发现的phomactin A-G化合物一样，属于血小板活化因子(PAF)拮抗剂，可抑制PAF诱导的血小板聚集，推测该活性与该化合物的一种特定骨架结构有关。

五个新的极性无环二萜化合物(51 ~ 55)从法国南部大西洋海岸采集的褐藻Bifurcaria分叉中分离得到[20]。褐藻经氯仿/甲醇(1:1)提取，硅胶层析(洗脱剂为不同比例的己烷、乙酸乙酯、甲醇)，反相C-18柱高效液相色谱纯化，得到12个化合物，其中5个为新二萜类化合物。在己烷:乙酸乙酯(2:3)的洗脱液中发现化合物(51 ~ 53)，而在己烷:乙酸乙酯(1:4)的洗脱液中得到化合物(54)和(55)。

从采自西班牙特内里费岛南部加那利群岛的红藻凹顶藻中分离得到6个新的Dactylomelane二萜化合物(56 ~ 61 ),它们的结构具有从C-6到C-11的新的环状碳结构。收集的红藻用有机溶剂CH2Cl2/MeOH(1:1)提取，然后用反相色谱法分离，洗脱剂为己烷/CHCl3/MeOH (2: 1: 1)，结合HPLC，用洗脱剂ETAC/MeOH分离所选部分。二萜luzodiol (62) [9]也从红藻L. luzonensis中分离得到。一种溴化二萜化合物(63)是从日本的其他红藻凹顶藻物种中分离出来的[22]。

Xenicane二萜类化合物(64 ~ 71)是从台湾省的珊瑚Xenia blumi中分离出来的，而化合物Xeniolactones A-C (72 ~ 74)是从台湾省的Xenia florida中分离出来的[23]。化合物(64 ~ 67)、(69)、(70)和(72)具有轻微的细胞毒性。Xenibellal (75)，一种非Xenicane代谢物，对伞形花Xenia也有轻微的细胞毒性作用[24]。化合物Confertdiate (76)是一种四环二萜，分离自中国珊瑚虫conferta [25]。

Actiniarins A-C (77 ~ 79)，一种从史密森尼癌症研究所收集的银莲花中分离的二萜，可以适度抑制人cdc25B磷酸酶的重组[26]。Periconicins A，B (80 ~ 81) [27]是从内生红树真菌Periconia sp .中分离的新二萜类化合物。能抑制不同微生物的生长活性，如枯草芽孢杆菌ATCC 6633、金黄色葡萄球菌ATCC 6358p和表皮葡萄球菌ATCC 12228。

南海真菌2492#是从香港红树林植物澳大利亚石竹样品中分离得到的。从2492#菌株发酵液中分离得到的两个二萜类化合物(82 ~ 83)具有良好的生理活性[28]，如抗肿瘤、抗高血压、调节心律失常等。同时，降压和调节心律失常的效果优于同等条件下的临床阳性对照。

从红树植物木榄中分离出二萜类化合物(84 ~ 86)。化合物(86)对小鼠成纤维细胞具有适当的细胞毒性活性[29]。从木榄中还分离出3个二萜化合物(87 ~ 89)。Rhynchopetala，中国的另一种红树植物[30]。从木榄中分离出结构相似的二萜类化合物(90 ~ 93)，其中化合物(92)和(93)具有轻微的细胞毒性[31]。

1.4倍半萜烯化合物aspergilloxide (94)由倍半萜烯纪凡芬尼克研究组从海洋真菌曲霉(菌株编号CNM-713)中分离得到。该化合物为25个碳原子的新骨架，对人结肠癌细胞HCT-116弱。在此之前，纪凡·费尼卡尔等人还从巴哈马群岛红树林的浮木中分离出一种真菌异孢镰孢CNC-477，并分离出一系列多羟基倍半萜类新芒果醇A-C (95 ~ 97) [33]和芒果醇A-G (98 ~ 104) [6]。新芒果醇的骨架是一个25碳的倍半萜烯，首次从天然产物中分离得到。药理实验表明，化合物(96)对革兰氏阳性菌的抑制能力与庆大霉素大致相当，化合物(98)和(99)对MPA(佛波醇肉豆蔻酸酯醋酸酯)诱导的小鼠耳水肿具有抗炎活性。1.5三萜从海洋生物中提取的三萜类化合物主要以三萜皂苷、三萜和三萜苷的形式存在。四环三萜皂苷nobilisidenol (105)和(106)是从中国黑胸海参[34]中分离得到的。将采自福建东山的黑胸海参洗净切碎，用85%乙醇提取。将所得流浸膏均匀分散在水中，然后依次用石油醚、二氯甲烷和正丁醇萃取。发现正丁醇提取物经大孔吸附树脂、常规硅胶层析、反相C-18硅胶柱层析和反相C-18柱HPLC分离得到三萜皂苷。易等人还从海参中提取了其他三萜苷类和三萜皂苷类脱硫衍生物[35，36]。三萜化合物intercedes D-I(107-112)是从中国海参Mensamaria intercedens中分离出来的，它具有细胞毒作用[37]。新西兰海参Australostichopus mollis是单硫酸盐三萜苷mollisides A (113)、B1 (114)和B2(115)的来源[38]。

具有细胞溶解活性的三萜类化合物sodwannone S(116)从印度洋毛状岛收集的海绵Axinella weltneri中分离得到[39]。三萜苷sarasinoides J-M(117-120)分离自印度尼西亚苏拉威西岛采集的海绵Melophlus sarassinorum，对枯草芽孢杆菌和酿酒酵母具有抗菌活性[40]。

2种糖苷化合物

从采自海南的甲藻中分离得到一种不饱和糖基甘油酯化合物(121) [41]。甲藻采自中国海南三亚。分离筛选出卡塔曲霉，用甲苯/甲醇(1:3)有机溶剂提取。分别用甲苯和1N NaCl水溶液提取干燥产物。发现有机相提取物通过硅胶柱(洗脱剂为不同比例的甲醇/氯仿)，反相C-18硅胶柱色谱(洗脱剂为甲醇/H2O=9:1)，最后通过反相C-18柱制备型HPLC(流动相为甲醇/H2O =95:5)可以从该化合物中分离出含有6-脱氧-6-氨基糖苷的甘油酯(122)

从韩国海绵Homaxinella sp .中分离得到两种单甘油酯，homaxinolin(123)和(124)，磷脂酰胆碱homaxinolin(125)和脂肪酸(126)。[43].Erylosides K(127)和L(128)，这两个从红海采集的海绵Erylus lendenfeldi中分离的甾体糖苷，可以选择性地抑制酵母菌株的rad50芽，rad50可以修复受损的双链DNA [44]。

刺参由SJC-1(129)、SJC-2 (130)、SJC-3 (131)、SJC-4 (132)五种糖苷化合物组成。从弱极性氯仿/甲醇中分离出5个化合物，其中SJC-1 (129)、SJC-2 (130)和SJC-3 (131)是典型的鞘脂或植物型鞘脂。SJC-4(132)和SJC-5(133)也含有羟基化的脂肪酰基结构，但含有独特的鞘脂基团，是两种新的葡萄糖脑苷脂。Linciacerebroside A (134)是从日本海星Linckia laevigata中分离出的一种新的糖苷化合物[46]。

甾体糖苷孕烷-5，20-二烯-3β-醇-3-O-α-L-吡喃糖苷(135)和孕烷-5，20-二烯-3β-醇-3-O-β-D-吡喃木糖苷(65438+)将干重为1.6 kg的新鲜软珊瑚在室温下用乙醇浸泡三次，合并提取液，减压浓缩得到深棕色提取物168用石油醚和乙酸乙酯(20:80)梯度洗脱，洗脱液经反相C-18柱高效液相色谱分离，用甲醇洗脱，得到60mg(135)和3mg(136)化合物，具有抗早孕和抑制肿瘤细胞生长活性。

从中国珊瑚灯心草乙醇/二氯甲烷提取物中分离出四种甾体糖苷(137-140)[48]。

3结论

目前，在海洋生物中发现的天然萜类和苷类化合物的数量近年来逐渐增加。有些化合物是有前途的药物先导化合物，活性明确，活性强，但用于临床研究的化合物相对较少，因此有必要开发更多新的天然化合物。其次，海洋生物中发现的活性化合物也存在活性低或毒性大等问题，可以对其结构进行改造以达到最佳效果。此外，从海洋生物中提取的活性化合物含量通常较低，且化合物受到提取试剂和方法等外部因素的影响。因此，采用化学合成法半合成或全合成化合物，可以解决萃取过程中结构易挥发、试剂消耗大的缺点。例如，从海洋真菌中分离出具有新结构并具有抗菌、抗癌和神经心血管活性的头孢菌素C。它是一大类半合成的著名抗生素，已广泛应用于临床[49]。因此，通常采用合成或半合成的方法来解决活性化合物作为药物来源的大规模生产模式。我们期望这些药物先导化合物在药物开发中发挥重要作用。