大肠杆菌检验的意义及三冷食品的检验
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我给你提供一些关于大肠杆菌的信息，比较乱。你自己去整理吧。
没听说过“三凉食”这个名词。如果你能解释一下，也许我会知道。
大肠杆菌O157: H7实验诊断的研究进展
大肠杆菌O157: H7感染的临床表现
出血性肠炎:便血，腹部痉挛性疼痛，低热或不热。
溶血性尿毒症综合征(HUS):主要发生于儿童，常发生于腹泻后数天或0-2周。死亡率一般为10%，分别可高达50%。
血栓性血小板减少性紫癜(TTP):主要发生在成人，尤其是老年人。患者的主要症状是发热、血小板减少、溶血性贫血和肾功能异常。该病发展迅速，死亡率高，有时70%的患者死亡。
大肠杆菌O157: H7的传染源和传播途径
大肠杆菌O157: H7基本属于食源性致病菌，可通过食用被大肠杆菌O157: H7污染的牛肉、牛奶、牛肉或制品、鸡肉、蔬菜、水果、饮料、水等而感染，也可通过人与动物的密切接触传播。
在实验室中，大肠杆菌O157: H7可感染小鼠、鸡、兔、猪、牛等动物。
大肠杆菌O157: H7的感染已经成为一个世界性的问题。
我国的情况也不容乐观。
一、细菌的培养和鉴定
1.孤立和文化
早期培养对确定病原体有重要意义。
培养的对象是急性血性腹泻，其次是HUS、TTP等住院患者，再其次是高危接触者。
中等:
山梨醇麦康凯琼脂，胰蛋白胨大豆琼脂
改良曙红亚甲蓝和改良SD-39(MSD)琼脂。
添加了头孢克肟和亚碲酸钾的山梨醇麦康凯琼脂(TC-SMAC)。
添加了头孢克肟和鼠李糖(0.5%)的山梨醇麦康凯琼脂(CR-SMAC)。
大肠杆菌O157: H7的显色培养基
四溴氟亚甲基蓝琼脂
H7抗血清-山梨醇发酵培养基
浓缩溶液:
含10mg/L新霉素的EB肉汤或肠道增菌液。
含有10毫克/升新霉素或10毫克/升盐酸-吖啶黄的蛋白胨大豆肉汤。
新霉素MEC肉汤
月桂基胰蛋白胨肉汤
在以下实施例中加入任何抑制剂都可以增加培养基的选择性。
0.05毫克/升头孢克肟和2.5毫克/升亚碲酸钾。
新霉素10毫克/升万古霉素40毫克/升
2.免疫磁珠分离法
免疫磁珠分离法是将特异性抗体吸附在可吸附的磁珠上，然后利用抗原抗体反应特性富集样品中的大肠杆菌O157: H7。
方法:1。富集细菌；2.取样品1毫升，加入20微升大肠杆菌O157: H7免疫磁珠；3.轻轻搅拌10分钟；4.将试管插入磁架；5.吸取上清液；6.加入PBS，重复3-5的过程；7.从管壁上取沉淀，划线并接种于选择性培养基中，如CT-山梨醇麦凯琼脂(C-头孢克肟，T-亚碲酸钾)。37℃培养6-24小时，挑取可疑菌落进行鉴定。
Chapman等人* * *检测了690份粪便样品，其中25份是通过免疫磁珠分离法检测的。免疫磁珠法分离的l2大肠杆菌O157: H7中，直接培养仅5株为阳性。
Wright等人在含有万古霉素和头孢克肟的缓冲蛋白胨水中培养接种了大肠杆菌O157: H7的牛肉糜样品，然后直接或用包被了大肠杆菌O157抗体的磁珠分离细菌，并将其接种到CT-SMAC中。结果，直接二次培养的检测量为200cfu/g，而免疫磁珠分离法只需要2 cfu/g..
Chapman等人先用EC肉汤富集细菌，再用免疫磁分离法富集牛粪便大肠杆菌O157: H7，再用选择性培养基分离，并与CR-SMAC和CT-MAC直接培养法进行比较。前者为大肠杆菌O157: H7的12株，其灵敏度比在两种培养基上直接培养高100倍。
Cubbon等人通过免疫磁分离(IMS)在牛粪便和食品样品中检测出大肠杆菌O157: H7。在一起牛奶传播的大肠杆菌O157: H7暴发疫情中，采用IMS、粪便培养和聚合酶链反应检测Vero毒素基因携带者，比较三种方法对粪便大肠杆菌O157: H7的分离率。在检查的142份粪便样本中，有20份直接培养和IMS呈阳性。因此，IMS提高了大肠杆菌O157: H7感染病例的检出率，与PCR的符合率较高。
目前，被污染的肉类、牲畜甚至饮用水都受到大肠杆菌O157: H7的威胁。传统的培养方法对于检测食品和水源中的肠道致病菌并不理想。IMS和其他检测方法的研究表明，食品和环境样品的快速检测似乎有很好的前景。于等使用离子迁移谱结合电化学发光检测(ECL)检测食品和污染物中的大肠杆菌。结果表明，大肠杆菌在原缓冲液中的检测标准为100-1000 cfu/lm，在食品中的检测范围为1000-2000 cfu/lm，检测时间很快，一般不到1小时。菌株O157: H7的牛粪悬浮液在两种培养基上的敏感性比直接培养的高100倍。在4个月的牛监测期间，共采集牛直肠标本1024份，其中检出大肠杆菌O157: H784 (8.2%)，通过直接培养和IMS分离出23份(27.4%)。在23个样本中，15被两种培养基分离，其中5个被CT-SMAC分离，3个被Cr-SMAC分离，剩下的61 (72.6%)被IMS分离。用含吐温-20的PBS洗涤磁珠，可以减少其他微生物对磁珠的非特异性结合。磁铁包被无关抗体时，大肠杆菌O157: H7不会结合。IMS快速、简便、特异，在流行病学调查中有一定价值。
3.生化反应
目前，许多国家使用的O157和H7特异性抗体与少数细菌存在不同程度的交叉反应。因此，有必要通过生化试验来鉴定大肠杆菌。
典型大肠杆菌的主要生化反应结果如下:
动力学试验(+)葡萄糖(+)麦芽糖(+)甘露醇(+)蔗糖(-/+)硫化氢(-)尿素(-)靛蓝底物(+)甲基红(+) V-P试验(-)柠檬酸盐(-)苯丙氨酸脱羧酶(-)赖氨酸脱羧酶(+/-
有关对O157鉴定有意义的生化反应，请参见表1。
MUG是4-甲基伞形酮-β-葡萄糖醛酸苷。大多数大肠杆菌都有葡萄糖醛酸酶，能水解MUG产生荧光，但O157: H7中的大多数菌株不水解MUG。Thompson等人建立了快速MUG试验，将0.5ml MUG试剂置于试管中，用无菌棉签挑取待测菌的纯培养物混匀，在高强度光源下，于44.5℃暗室中观察20分钟，得出结果。那些产生蓝色荧光的是阳性的。
二。血清学测试
1.玻片凝集试验
2.胶体金免疫分析
3.酶联免疫吸附测定
4.免疫荧光技术
5.胶乳凝集
6.间接血凝分析(IEHA)
7.自动抗原抗体检测系统
8.免疫印迹
1.玻片凝集试验
玻片凝集试验是鉴定O抗原最经典的方法。如果实验中凝集反应不明确，但根据临床表现和生化反应菌株高度可疑，可将菌液在100℃加热30min后进行玻片凝集试验。这样可以去除K抗原的影响。为消除交叉反应引起的凝集反应造成的假阳性，应做试管凝集反应，测定的效价不得低于诊断血清原校准效价的一半。鉴定H抗原要同时做玻片试验和试管凝集试验，先做待检菌，通电时取培养物做H抗原鉴定。
2.胶体金免疫分析
胶体金免疫技术的特点是以胶体金为标记物进行抗原抗体反应。这项技术最初用于免疫电镜。迄今为止，在免疫分析中，金标记常与膜载体配合形成特定的图案，如斑点免疫渗滤试验和斑点免疫层析试验，作为一种简单快速的血清学检测方法，已被广泛应用。
胶体金多采用还原法制备，氯金酸是主要的还原物质。金颗粒的大小取决于制备过程中添加的柠檬酸三钠的量。
在胶体金免疫层析测试中，以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔膜的毛细作用，将滴在膜一端的液体缓慢迁移到另一端，就像层析一样。
中国预防医学科学院微生物研究所利用胶体金技术、双抗体夹心法和显色反应研制出大肠杆菌O157: H7病原体快速检测金卡，一般用于粪便、食品、水等样品中大肠杆菌O157: H7的定性检测。显色程度与样品中细菌含量成正比，最小细菌检出量小于100个细菌细胞。其主要特点是灵敏度高，可用于待测样品的初筛，阳性样品可通过细菌分离，减少工作量。
3.酶联免疫吸附测定
大肠杆菌O157: H7常见的检测方法是粪便培养后分离细菌，再用生化和免疫学方法进行鉴定，一般需要72小时。
Dylla等通过快速ELISA直接检测粪便中的大肠杆菌O157: H7，并与标准培养法进行比较。结果表明，ELISA检测183份粪便样品，检出大肠杆菌o 157:H7 9株。常规培养法对176为阴性，而ELISA对174为阴性。总特异性为98.9%。该方法与其他非O157: H7大肠杆菌无交叉反应，是一种准确、敏感、特异、易于观察的筛查方法，特别适用于中小型实验室和大量粪便样本的流行病学调查。
Padhye等用单克隆抗体直接ELISA反应检测O157: H7，除O26 :H11+0外，未发现与沙门氏菌、耶尔森菌结肠炎、志贺菌、肺炎克雷伯菌有交叉反应。单克隆抗体检测大肠杆菌O157: H7具有明显的特异性，可作为免疫试剂用于临床和食品样品的快速检测。克拉克对单克隆抗体的进一步研究发现，这种单克隆抗体识别的物质是LPS。这种LPS抗原决定簇在其他血清型的大肠杆菌和含或不含Vero毒素的大肠杆菌中也能被全细胞ELISA检测到，且易受胆盐、吖啶黄和温度的影响。但结合免疫捕获的修饰方案可以提高ELISA的特异性。
4.免疫荧光技术
灵巧的；
直接荧光技术(DEFT)和基于抗体的荧光技术(AB-DEFT)的主要特点是在显微镜下直接对样本的细菌细胞进行计数。因为不需要培养或分离过程，所以检测非常快。DEFT的基本原理是:对样品进行过滤，用荧光染料(如吖啶橙)对留在滤膜上的细菌细胞进行染色，然后用荧光显微镜进行观察和计数。但由于荧光染料的非特异性染色，不仅被检菌被染色，背景菌也会被染色，影响结果的准确性。Ab-DEFT克服了这一缺点，过滤后的细菌细胞与荧光标记的特异性抗体相互作用，然后通过荧光显微镜进行观察和计数。
固相荧光毛细管免疫分析
该方法灵敏度高，具有快速、试剂用量少、操作简便等优点。Czajlu等人使用热杀死的O157: H7细菌来涂覆玻璃毛细管作为固体支持物。
将与生物素结合的多克隆抗体O157: H7加入到样品中一段时间，然后将样品/抗体混合物和用Cy5(一种荧光花青染料)标记的亲和素加入到毛细管中，孵育2分钟，洗涤并干燥，花青染料被激光传感器系统发射的波长为650nm的激发光激发，然后通过光学传感器系统测量荧光发射密度。
直接免疫荧光抗体染色
Park等将粪便样本离心，用免疫荧光抗体标记粪便涂片，可检出培养法确认的所有菌株，检出时间为
5.胶乳凝集
该方法以乳胶粒为载体，用特异性抗体O157: H7致敏，制成特异性乳胶试剂。标本在载玻片或有色灼烧板上乳化，滴加乳胶试剂，当明显凝集而对照乳胶不凝集时为阳性。
6.间接血凝分析(IEHA)
这种方法多用于LPS、可溶性大块抗原和未加热抗原的抗体检测，对H抗原的抗体检测无效。Morooka等人检测了溶血性尿毒症综合征(HUS)患者的血清LPS抗体。虽然甲醛绵羊红细胞(SRBC)具有低水平的非特异性吸附，但这并不影响该方法作为一种有效和快速(
7.自动抗原抗体检测系统
VIDAS是一种自动抗原抗体检测系统。可直接从传染病患者体内检测出细菌、病毒、弓形虫、衣原体、螺旋体等微生物的抗原、抗体或毒素。
基本原理:利用酶联免疫吸附法(夹心法)原理，在底物中掺杂荧光物质，最终产生荧光产物4-甲基-7-羟基刀豆。荧光强度与样品中被检测物质的浓度有关。通过扫描样品的读数与标准比较计算标准值，根据正负临界值判断结果。
8.免疫印迹
目的检测大肠杆菌O157: H7感染者血清中抗脂多糖和溶血素的特异性抗体。基本原理是用SDS- PAGE分离纯化的脂多糖或溶血素，然后用转移电泳转移到硝酸纤维素膜上，再用抗原和抗体进行免疫检测。包括SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、转移电泳和免疫分析。
其特点是特异性和敏感性高。
免疫检测
将密封好的硝酸纤维素膜按梳齿宽度剪成一条泳道，依次编号。
1)每条加入1 ml用PBS稀释的患者血清，室温摇匀2小时，设阳性对照和阴性对照；
2)用2.5毫升/PBST冲洗3次，每次5分钟；
3)加入用1毫升PBS稀释的II抗体，室温下振荡1小时；
4)用2.5 ml/PBST洗两次，每次5分钟，再用PBS洗一次；
5)将膜放入12 ml显色液中显色，室温振摇15-30分钟，直至阳性对照出现满意的蓝紫色；
6)将胶片放入蒸馏水中停止显色反应并拍照；
7)当显色带与溶血素的分子量或0157脂多糖的带谱一致时，判定结果为阳性。
二。分子生物学检测
分子生物学的出现为更快地诊断微生物提供了许多分子工具。这项新的研究使用基因型而不是表型因素来识别特定的病原体。因此，其特异性更好。加上操作程序的自动化，DNA分析已经成为实验室应用中的常规操作。自动DNA提取器、聚合酶链式反应仪(PCR仪)、DNA序列分析仪、脉冲凝胶电泳仪(用于分离大的DNA片段，如完整的染色体)在疾病诊断中都非常有用。
1.DNA探针
探针标记:放射性核素和非放射性物质标记。
探针来源:①克隆的基因组DNA探针；②cDNA探针；8 ⑧RNA探针；④寡核苷酸探针。
标本处理:根据标本的来源和数量进行不同的处理。
杂交方法:斑点杂交、southern杂交、原位杂交、Northern杂交等。
杂交信号的检测:(1)测量放射性核素射线脉冲数(2)放射自显影(3)显色法(4)发光法。
o 157:H7特异性噬菌体上的slt和ⅱ基因，染色体上的大质粒溶血素基因和eae基因都已制成杂交检测的特异性探针。Beutin等人用VT1(750bp)、VT2(850bp)、溶血素(3.4kb)等探针进行流行病学调查。Thomas等人用地高辛标记的VT2B亚单位基因和VT2C基因探针检测不同的噬菌体类型O157: H7。Huck等人筛选了大质粒O157: H7上的限制性片段，开发了一个2.0kb的Sma I片段探针，被认为对血清型O157: H7最具特异性，能与所有实验细菌O157: H7杂交。
2.PCR技术
聚合酶链反应(PCR)是一种在体外选择性扩增DNA或RNA片段的方法。它具有特异性强、灵敏度高、快速、简便、可扩增RNA或cDNA、对起始材料质量要求低的优点。
PCR扩增系统的基本组件
引物:PCR产物的特异性主要取决于引物链的特异性。由于同源序列的存在和引物链的随机设计，电泳分析时PCR产物中可能出现多条链，因此设计引物链时应充分考虑引物特异性。引物长度一般为15-30个碱基，G+C含量为40- 60%，浓度为0.1-1 μm ol/L..
TaqDNA聚合酶:浓度为1-4ul/100ul。TaqDNA聚合酶单位剂量的增加可能导致非特异性DNA扩增。
模板DNA:应避免任何蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制剂和能结合DNA的蛋白酶。DNA模板的制备方法有加热法、冷冻法、超声波破碎法、碱变性法、SDS裂解法等。
4×dNTPS:dNTP储存溶液的pH值应为7.0。在反应体系中，四种DNTP的浓度应相同，每种DNTP的浓度应为50-200 umol/L
缓冲液和其他成分:Tris-HCl缓冲液一般用于PCR反应体系。Mg2+的适宜浓度比dNTP的总浓度高0.2-2.5 mmol/L。
PCR技术的循环参数
PCR扩增通过变性、退火和延伸的重复循环来实现。确定正确的循环参数是PCR成功的保证。
循环参数
1.变性温度和时间
模板DNA和PCR产物的不完全变性是PCR反应失败的最常见原因之一。在变性步骤中，变性条件为95℃30s完全分离双链DNA。对于GC含量高的目标DNA序列，较高的变性温度是合适的。在熔化温度下，DNA变性只需要几秒钟。然而，在反应管中达到熔化温度需要一些时间。原则上，变性步骤应该是高温和短时间的，也就是说，要保证充分的变性和在整个反应中保持聚合酶的活性。
循环参数
2.引物退火
引物退火的温度和时间取决于引物的长度、碱基组成及其在反应系统中的浓度。对于GC含量约为50%、长度为20个碱基的典型寡核苷酸引物，最佳退火温度为55℃。高温退火可以提高PCR的特异性。
循环参数
3.引物延伸:引物延伸是DNA聚合酶在引物的3’-OH端逐个添加脱氧单核苷酸，引物延伸温度取决于DNA聚合酶的最适温度。如果用TaqDNA聚合酶，一般用70-75℃，一般用72℃。延伸步骤的时间取决于靶序列的长度、浓度和延伸温度。靶序列越长，浓度越低，延伸温度越低，延伸所需时间越长。相反，靶序列越短，浓度越高，延伸温度越高，所需的延伸时间越短。一般来说，每1000个碱基序列，1分钟的延伸时间就足够了。对于100-300个碱基的短序列片段的扩增，可以省略温度延伸的步骤，采用快速简单的变性和退火双温循环。这是因为TaqDNA聚合酶即使在退火温度下仍保持非常高的活性，当退火温度变为变性温度时，延伸过程可以完成。
循环参数
扩增产物的长度为100 BP 500 BP 1000 BP 2000 BP。
94℃时的变性时间(秒)30 30 60 60
55℃时的复性时间(秒)30 30 60 60
72℃延长时间(秒)30 38 120 180
一般25-30个周期就够了，最后一个周期时间和延长时间增加5分钟。
PCR扩增产物的检测方法
PCR反应混合物循环扩增后，需要做的是检测反应液中是否存在预期的扩增产物和产物特异性。目前，已经发展了许多检测和分析PCR扩增产物的方法。包括凝胶电泳、高压液相色谱、核酸探针杂交、探针捕获酶免疫分析、限制性图谱分析、单链构型多态性分析和核酸序列分析。
PCR技术类型
免疫PCR技术、原位PCR技术和不对称PCR技术
巢式PCR技术反向PCR技术反转录PCR技术
复合PCR技术、彩色PCR技术和抗原捕获PCR技术
致敏PCR技术、酶标PCR技术和双温PCR技术
锚定PCR、定量PCR、毛细管PCR
多重PCR技术巢式或巢式PCR技术
PCR在大肠杆菌O157: H7检测中的应用
(1)简单PCR:孟等根据eae基因5’端附近的一段688bp的DNA片段设计了一对引物，扩增产物为一段633bp的DNA片段。退火温度为60℃-63℃。煮沸法和基因释放法对大肠杆菌O157: H7的检出限分别为25和38CFU/ml，检测时间为3h。
Thomas等通过PCR扩增slt基因片段。底漆:
正链5’-(tttacgatagattctcgacc)-3’，
反向链5’-(cacataaatttttcgctc)-3’
PCR产物用凝胶电泳测定，检测时间为ld
徐建国等人根据O157: H7独特的hlyA和b基因序列设计PCR引物，产物为338bp。
PCR在大肠杆菌O157: H7检测中的应用
(2)多重PCR:由于血清型O157: H7的鉴定不能单纯依靠简单PCR，近年来国外学者研究了多重PCR对大肠杆菌O157: H7的诊断价值。孟等同时扩增出eae上游基因片段、sitⅰ基因片段和sitⅱ基因片段，其长度分别为633、210和484bp。该引物设计可有效区分O157: H7血清型与O55: H7和O55: NM血清型。Fratamico等在一次反应中同时扩增eae基因、slt和ⅱ的保守序列和60MDa质粒的保守序列，产物分别为1087、227、224、166bp。李岩针对大肠杆菌O157: H7的志贺样毒素ⅰ、ⅱ (SLT-ⅰ、SLT-ⅱ)和溶血素(Hly)基因选择3对引物，在同一扩增体系中进行PCR，检测大肠杆菌O12株和其他致病性大肠杆菌、沙门氏菌。结果多重PCR方法比单一PCR方法具有更高的特异性，对菌株O12+057: H7的检测结果稳定可靠。能快速有效地与其他致病性大肠杆菌、沙门氏菌和志贺氏菌区分开来。
PCR在大肠杆菌O157: H7检测中的应用
(3)原位PCR:kurokawa等利用原位PCR技术结合发射显微镜，在单细胞水平快速检测O157: H7，无需培养过程。
4.23 srrna在大肠杆菌O157: H7分型和检测中的应用。
传统的细菌分类方法主要依赖于细菌的形态、代谢产物、酶活性和表面抗原等特征。随着现代分子生物学理论和技术的快速发展，微生物检测已经进入基因时代，基于核糖体RNA序列的分类方法为微生物鉴定提供了新的分子生物学方法。如16srRNA，23srRNA，16-23srRNA区间序列分析等。它完全不同于传统方法，具有快速、简便、灵敏和特异的优点。
23SrRNA基因的特征:
原核生物核糖体有三种大小(23S，16S，5S)。目前，拥有23SrRNA基因全长序列的菌株已达250株。长度约3000pb。对多种细菌的23SrRNA基因的序列分析表明，其序列的变异性比16SrRNA基因更明显，尤其是那些亲缘关系较近的细菌。利用这些可变区序列的差异，可以对同一菌株的不同菌株进行分类和鉴定。同时，对已知23SrRNA基因的序列分析也发现，在最初的520pb中有6个保守区域(5-10区域)，发现这6个保守区域中的6和10区域最为保守，序列在14株之间完全一致。
应用:
为了检测临床感染性疾病的病原体，首先在保守区设计两条引物成为通用引物，在变异区选择该序列作为特异性探针。先用通用引物进行PCR扩增，筛选出含有病原体的样本，再用特异性探针与扩增产物杂交，鉴定目标细菌，从而达到诊断病原体和分型的目的。
特定细菌种属的鉴定目前认为23SrRNA基因的IVSs具有种属特异性，用IVSs(插入序列)进行PCR扩增即可实现对某一属细菌的诊断。
在流行病学中的应用可以利用可变区序列的差异来分析同一菌株的不同菌株。为流行病提供证据。
除上述方法外，常用的有效检测方法还有脉冲场电泳、随机扩增多态性DNA指纹图谱、细胞毒性试验等。，这里就不详述了。
大肠杆菌O157: H7检验程序
样品富集6小时并用磁珠浓缩。
可疑菌落山梨醇麦康基琼脂
g染色生化反应血清学毒力基因
大肠杆菌O157: H7的实验室诊断
下列情况之一具有实验室诊断的意义:
1)腹泻患者粪便标本中分离出大肠杆菌o 157:H7；
2)经PCR或DNA杂交试验证实具有溶血素基因和志贺样毒素基因；
3)腹泻患者血清抗O157LPS IgG抗体在恢复期升高4倍；
4)血便腹泻患者急性期血清或恢复期血清，经蛋白质印迹试验证实含有针对O157LPS、EHEC溶血素或志贺毒素的特异性抗体。
总结
自从O157: H7被认识以来，对其基因的研究越来越细致，许多结构和功能基因被鉴定出来，对其病因学、病理学和临床治疗都有很大的促进作用。由于O157: H7引起感染所需的剂量很低，因此有必要发展一些高灵敏度的方法进行快速有效的检测。此外，还发现变异菌株很多，单靠一种方法检测往往不够。例如，SMAC检测不到发酵山梨醇的突变体；因为许多非EHEC(EPEC、霍乱弧菌、志贺氏菌等。)也能产生SLT，简单检测SLT也会产生假阳性结果。因此，对一个样本的检测需要结合多种方法才能获得准确的结果。
第三章大肠菌群的测定
一、大肠菌群试验
(1)检验方法
(2)培养基
(三)检查中的注意事项
二、大肠菌群的卫生学意义
大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，已在国内外食品卫生中得到广泛应用。这种菌群主要来源于人类和温血动物的粪便，一般被用作食品中粪便污染的指标。过去国内对大肠菌群的检测经验不多，对这一菌群的了解也不充分。1974年全国修订食品卫生菌检验方法座谈会和1976年全国食品卫生标准会议建议将大肠菌群作为粪便污染的指示菌，提出了大肠菌群的科研工作。因此，我们成立了大肠菌群科学协作组，对犬肠道菌群的检测方法(包括快速检测方法)及其卫生学意义进行了广泛的科学研究和实践，取得了一定的成果，为制定大肠菌群的检测方法提供了科学依据。
大肠菌群在修订l976版《食品卫生检验方法》的过程中，对1983 ~ 1985中的大肠菌群检验方法进行了实验研究，并进行了对比观察。同时还对我国常见的大肠菌群快速检测方法进行了探讨，为修订后的国家标准《食品卫生检验方法》微生物部分大肠菌群的测定提供了科学依据。
大肠菌群在细菌学上没有分类命名，而是根据卫生学要求，与粪便污染有关的一组细菌。这些细菌在生物化学和血清学上并不完全一致。它的定义是:指一组好氧兼性厌氧，能在37℃分解乳糖产生酸和气体。有科学家利用靛蓝基质、甲基红、V ~ P、柠檬酸盐、硫化氢、明胶、动力和乳糖在44.5℃分解，将这组细菌分为大肠杆菌、柠檬酸杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌。无论采用何种分类方法，大肠菌群的测定都应以上述定义为依据。
一、大肠菌群试验
(1)检验方法
1.乳糖发酵试验。采用无菌操作取标本，根据国家或地方卫生标准的要求和标本的污染情况确定用量和稀释倍数。将待测样品接种到乳糖胆盐发酵管中。如果接种量大于l m J，使用双乳糖胆盐发酵管，如果l m小于1和1mI，使用单乳糖胆盐发酵管。每个稀释度接种3管，置于36±1℃培养箱中，培养24±2小时。如果所有乳糖胆盐发酵管都不产气，可报大肠菌群阴性。如果有气体产生，按照以下程序进行。
2.孤立和文化。将产气发酵管转移至伊红亚甲蓝琼脂平板上，置于36 L℃培养箱中65438±08 ~ 24小时后取出，观察菌落形态，进行革兰氏染色和确证试验。
3.确认测试。在上述平板上，挑取l ~ 2个疑似大肠菌群进行革兰氏染色，同时，