跪撑法测定柠檬酸代谢相关酶活性的方法

柠檬酸合酶测定用缓冲液的制备:

样品缓冲液PH 7.5 100

tris/HCl 50 mM 0.6055克

KCl 100毫米0.7455克

EDTA 1毫米0.03722克

储存液体1 10毫升

乙酰辅酶A 2.5毫米20.225毫克

储存溶液2 10毫升

草酰乙酸(OAA)5毫米6.6035毫克

存储溶液3 10毫升

DTNB 5.025毫米19.914毫克

步骤:520微升样品缓冲液+20微升TNB+20微升乙酰辅酶a+20微升待测酶溶液，25℃温浴5分钟。加入20ulOAA立即放入恒温25℃的分光光度计中，在波长为412nm处测量3分钟的光密度变化值(每30秒记录一次光密度)。在25℃下重复测定，取其平均值作为测定值，酶活性的单位用U/min/g表示

计算:u/min/g = (Amin-A0)/min/mg(蛋白质)。

这个计算公式不是很清楚。

该方法来源于“缺氧缺氧复合运动大鼠心肌和骨骼肌的适应性变化及机制”(第三军医大学博士论文，2005)。